Главная » 2013 » Октябрь » 22 » Скачать Экспериментальные исследования регуляции эритропоэза в культуре эритробластических островков. Тишевская, Наталья Викторовна бесплатно
17:35
Скачать Экспериментальные исследования регуляции эритропоэза в культуре эритробластических островков. Тишевская, Наталья Викторовна бесплатно
Экспериментальные исследования регуляции эритропоэза в культуре эритробластических островков
Диссертация
Автор: Тишевская, Наталья Викторовна
Название: Экспериментальные исследования регуляции эритропоэза в культуре эритробластических островков
Справка: Тишевская, Наталья Викторовна. Экспериментальные исследования регуляции эритропоэза в культуре эритробластических островков : диссертация доктора медицинских наук : 03.00.13 / Тишевская Наталья Викторовна; [Место защиты: ФГУН "Российский научный центр "Восстановительная травматология и ортопедия"] - Курган, 2005 - Количество страниц: 261 с. 25 ил. Курган, 2005 286 c. :
Объем: 286 стр.
Информация: Курган, 2005
Содержание:
ВВЕДЕНИЕ
Глава 1 ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
11 Современные представления об эритропоэзе и структуре эритрона
111 Стволовая кроветворная клетка и ее пролиферативный потенциал
112 Особенности пролиферации и дифференциации поли- и бипотентных коммутированных клеток-предшественниц
113 Транскрипционные факторы, определяющие фенотип ? -эритроидных клеток
12 Современный взгляд на гуморальную регуляцию эритропоэза
121Механизмы действия цитокинов и их значение в регуляции развития эритроидных клеток
122 Эритропоэтинпродуцирующие клетки и регуляция их функции
123 Биохимическая структура молекулы эритропоэтина- , , Характеристика гена эритропоэтина
124 Характеристика эритропоэтинчувствительных клеток Функции эритропоэтина
125 Особенности рецепции эритропоэтина клетками-мишенями
13 Роль гемопоэтического микроокружения и межклеточных взаимодействий в регуляции эритропоэза
131Гликозаминогликаны и протеогликаны
132Структурные фибриллярные белки (коллаген, эластин)
133Адгезивные белки (фибронектин, хемонектин, ламинин, тромбоспондин, CD44)
14 Эритробластический островок — функционально-анатомическая единица эритрона
Глава 2 МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
21 Техника культивирования эритробластических островков костного мозга крысы
211 Оборудование
212 Состав культуральной среды
213 Характеристика лабораторных животных, костный мозг которых использовался в качестве источника ЭО
214 Выделение ЭО из костного мозга бедренных костей крысы и получение материала для культивирования:
22 Морфологическая оценка клеток в культуре ЭО'и85,
23 Оценка пролиферативной активности*эритроидных клеток,в культуре, ЭО
24 Исследование фагоцитарной активности центральных макрофагов в , культуре ЭО'
25 Метод выделения фракций «средних молекул» из плазмы интактных -и обожженных животных
26 Статистические методы, примененные для анализа полученных экспериментальных данных
261 Последовательный критерий отношения правдоподобия (критерий Вальда)
262 Метод оценки интегральных различий между опытными и контрольными группами исследуемых показателей
263 Однофакторный диверсионный анализ
264 Одномерный двухфакторный дисперсионный анализ
265 Построение нелинейных двумерных математических моделей эритропоэза in vitro
Глава 3 ВЛИЯНИЕ ЭРИТРОПОЭТИНА НА РАЗВИТИЕ КУЛЬТУРЫ ЭРИТРОБЛАСТИЧЕСКИХ ОСТРОВКОВ
31 Морфологический анализ эритробластических островков, культивируемых в присутствии различных концентраций рекомбинантного эритропоэтина человека
32 Дозозависимые кривые развития эритробластических островков в культуре
33 Сравнительный анализ эффективности влияния эритропоэтина разных фирм-производителей на развитие культуры ЭО
34 Исследование влияния эритропоэтина на пролиферативную активность эритроидных клеток в культуре ЭО:
35 Исследование влияния эритропоэтина на фагоцитарную активность центральных макрофагов в культуре ЭО
36 Изучение влияния эритропоэтина на адгезию клеток неэритроидных линий к «короне» ЭО:
Глава 4 МАТЕМАТИЧЕСКОЕ МОДЕЛИРОВАНИЕ ЭРИТРОПОЭЗА В КУЛЬТУРЕ ЭРИТРОБЛАСТИЧЕСКИХ ОСТРОВКОВ
Глава 5 ВЛИЯНИЕ МАКРОФАГАЛЬНОГО КОЛОНИЕСТИМУЛИРУЮЩЕГО ФАКТОРА НА КУЛЬТУРУ ЭРИТРОБЛАСТИЧЕСКИХ ОСТРОВКОВ
51 Морфологический анализ эритробластических островков, культивируемых в присутствии различных концентраций М-КСФ
52 Изменение пролиферативной активности эритроидных клеток в культуре ЭО под влиянием М-КСФ
53 Влияние М-КСФ на фагоцитарную активность центральных макрофагов ЭО в культуре
54 Изучение влияния М-КСФ на адгезию клеток неэритроидных линий к «короне» ЭО
Глава 6 ВЛИНИЕ КАТЕХОЛАМИНОВ НА ЭРИТРОПОЭЗ В КУЛЬТУРЕ ЭРИТРОБЛАСТИЧЕСКИХ ОСТРОВКОВ
61 Морфологический анализ эритробластических островков, культивируемых в присутствии различных концентраций катехоламинов
62 Влияние катехоламинов на пролиферативную активность эритроидных клеток в культуре ЭО
63 Изучение влияния катехоламинов на адгезию клеток неэритроидных линий к «короне» ЭО
Глава 7 ВЛИЯНИЕ ФРАКЦИЙ «СРЕДНИХ МОЛЕКУЛ» НА ЭРИТРОПОЭЗ В КУЛЬТУРЕ ЭРИТРОБЛАСТИЧЕСКИХ ОСТРОВКОВ
71 Морфологический анализ эритробластических островков, культивируемых в присутствии различных концентраций фракций «средних молекул»
72 Влияние фракций «средних молекул» на пролиферативную активность эритроидных клеток в культуре ЭО
73 Изучение влияния фракций «средних молекул» на адгезию клеток неэритроидных линий к «короне» ЭО
Введение:
Актуальность проблемы.
Механизм образования эритроцитов в организме подвержен сложному позитивному и негативному контролю со стороны ростовых факторов, эндокринной системы, элементов гемопоэтического микроокружения, цитокинов, и медиаторов вегетативной нервной системы. Детальное описание схемы развития эритроидных элементов включает в себя как факторы, запускающие процесс пролиферации ранних клеток-предшественниц эритропоэза, так и биологически активные вещества, регулирующие деление коммитированных эритроидных клеток, процессы терминального созревания эритробластов, а также механизмы выхода ретикулоцитов в циркуляторное русло. В последние десятилетия большая роль в регуляции эритропоэза отводится межклеточным взаимодействиям, обеспечивающим адгезию эритроидных клеток к экстрацеллюлярному матриксу, облегчающим дифференциацию и созревание клеток эритроидной линии, способствующим связыванию сигнальных молекул со специфическими рецепторами на клеточной поверхности. В то же время подавляющее большинство работ в области экспериментальной гематологии направлено на изучение регуляции самых ранних этапов развития кроветворной ткани - стволовых и полустволовых кроветворных клеток, а также поли- и бипотентных клеток-предшественниц. Даже специфическому для эритроидного ростка кроветворения гормону эритропоэтину при рассмотрении заключительных стадий развития красных клеток крови зачастую отводится роль исключительно фактора выживания, препятствующего лишь программированной клеточной смерти, т.е. апоптозу (Владимирская Е.Б., 2000). Однако синтез гемоглобина, функциональная перестройка ферментных систем, характерная для зрелых эритроидных клеток, процесс денуклеации нормобластов происходят в терминальной стадии эритропоэза, а при исследовании количества сайтов связывания эритропоэтина на дифференцирующихся эритроидных клетках было установлено, что наибольшая плотность рецепторов к эритропоэтину обнаруживается на мембранах проэритробластов и ранних полихроматофильных эритробластов (Bacis J., 1985), причем в условиях индуцированной анемии число сайтов связывания эритропоэтина на указанных клетках возрастает (Akahane К., 1989). Нарушения процессов дифференциации и созревания эритроидных элементов на отрезке «колониеобразующая единица эритроцитарная — ретикулоциты» могут привести к возникновению ряда гематологических заболеваний. Так, высокая активность гемоксигеназы в КОЕэ препятствует гемоглобинезации клеток и замедляет образование эритробластов, что является одной из причин развития сидеробластной анемии (Ibraham N.G., 1985), ускорение созревания эритробластов приводит к формированию вторичных эритроцитозов, а замедление дифференциации базофильных эритробластов в полихроматофильные в эритробластических островках является одним из механизмов патогенеза апластической анемии (Коробкин А.В., 1988). В связи с этим, изучение механизмов регуляции финальных этапов эритропоэза представляется чрезвычайно актуальным, так как расширит наши представления о патогенезах болезней системы кроветворения, сопровождающихся как депрессией эритроидного ростка в костном мозге, так и его активацией.
Установлено, что терминальные стадии эритропоэза протекают в эритробластических островках (ЭО), представляющих собой ассоциации костномозговых макрофагов с эритроидными клетками разной степени дифференцированности - от проэритробластов до ретикулоцитов (Захаров Ю.М., 1982-2004; Bessis М.и Breton-Gorius J., 1956; Allen Т., 1982, 1991; Bentley S., 1982; Crocker P., 1985; Deimann W., 1991; Koury S. 1988, 1989; Lee S., 1991; Simmons P., 1984; Sadahira Y.1999; Bernard J.,
1991). При изучении динамики развития эритропоэза в эритробластических островках, выделенных из костного мозга больных с апластической анемией, истинной полицитемией и вторичными эритроцитозами, а также из костного мозга интактных животных, животных со стимулированным введением эритропоэтина или кровопотерей эритропоэзом, в экспериментах, моделирующих угнетение красного ростка кроветворения (посттрансфузионная полицитемия, экспериментальная спленомегалия, длительное тепловое воздействие и т.д.) были получены данные о том, что от функционального состояния центральных макрофагов островков зависит интенсивность развития их эритроидной «короны» (Воргова JI.B., 1990; Волков А.В., 1994; Захаров Ю.М., 1984-2004; Коробкин А.В., 1988; Мельников И.Ю., 1987; Пушкарев В.П., 1991; Рассохин А.Г., 1989-2002). Однако в условиях целостного организма выраженность ответной реакции эритроидной ткани на воздействие патогенных факторов или экзогенно вводимых регуляторов эритропоэза всегда сочетается с эффектами эндогенных гормонов, медиаторов и биологически активных веществ. Кроме того, в экспериментах, проводимых in vivo, или при отборе группы больных сложно стандартизировать условия окружающей среды и состояние висцеральных систем организма, а также в ряде случаев получить достаточное количество клеточного материала кроветворной ткани для исследования. На настоящем этапе развития экспериментальной гематологии особенно актуальным и перспективным является создание и внедрение в практику изучения кроветворения методов культуры клеток костного мозга — эти разработки позволяют перевести фундаментальные исследования воздействия гуморальных регуляторов гемопоэза на качественно новый уровень, так как дают возможность изучения влияния биологически активных веществ непосредственно на кроветворные клетки, и позволяют оценить роль кроветворных и стромальных межклеточных взаимодействий в кроветворении.
Среди большого количества живых клеток, которые возможно выращивать in vitro, гемопоэтические клетки составляют отдельную категорию, так как воссоздание функционирующей кроветворной ткани редко предполагает получение логарифмического роста культуры. В связи с этим клетки-предшественницы различных гемопоэтических линий никогда не культивируются в чистом виде, а только в виде гистиотипических культур, в которых сохраняются межклеточные взаимодействия и связи с экстрацеллюлярным матриксом. Для решения задач, связанных с изучением регуляции развития кроветворных клеток-предшественниц (за исключением стволовых кроветворных клеток), как правило, используют первичные гетерогенные культуры, поскольку неоднократное субкультивирование приводит к потере дифференцировочных признаков, хромосомным перестройкам или точечным мутациям (Адаме Р., 1983; Дьяконов Л.П., 1988; Лурия Е.А., 1972).
Большинство экспериментов по культивированию коммитированных клеток-предшественниц гемопоэза были проведены с использованием техники постановки культур в полутвердых средах: плазменном сгустке, агаровом, коллагеновом или метилцеллюлозном геле (Захаров Ю.М., 1988; Гольдберг Е.Д., 1992). Однако каждый из этих методов не лишен недостатков. Так, плазменный сгусток, несмотря на хорошую способность к поддержанию роста колоний, довольно быстро разжижается в местах скопления клеток, в результате чего клетки оказываются погруженными в жидкость, что приводит к гипоксии клеток и нарушает структуру межклеточных контактов. Кроме того, из-за сложного белкового состава субстрата в культуре на плазменном сгустке и в коллагеновом геле невозможно провести биохимические исследования и тестирование биологически активных веществ. Метод культивирования в агаровом геле не получил широкого распространения из-за своей статичности, так как твердое состояние агара не позволяет добавлять компоненты или обновлять состав среды в процессе культивирования.
Другим направлением в развитии экспериментальной гематологии явилось культивирование гемопоэтических клеток совместно с элементами стромы, техника которого была разработана Т. Dexter (1979, 1984). Большое достоинство этой культуральной системы — ее двухфазность, благодаря которой кроветворные элементы остаются доступными для всестороннего исследования без повреждения адгезивного слоя в течение длительного времени. Правильно установленная система по Декстеру способна поддерживать развитие морфологически распознаваемых кроветворных линий в течение 9-18 недель, за что этот метод получил название долговременных жидких культур костного мозга (Dexter Т., 1979). Развивающаяся стромальная подложка представляет собой многослойную структуру, состоящую из фибробластов, ретикулярных и эндотелиальных клеток, макрофагов и адипоцитов (Фриденштейн А.Я. 1980, 1988; Кузнецов С.А., 1988). Однако, несмотря на успешное функционирование созданной Декстером многокомпонентной модели костного мозга, ввиду гетерогенности клеточных популяций и продукции клетками гемопоэзиндуцирующих соединений она не позволяет исследовать влияние внесенного в культуру цитокина на развитие представителей определенной клеточной линии или же механизмы сигнальных взаимодействий клеток одной кроветворной линии с элементами другой. Кроме того, интенсивная пролиферация и частичная дифференциация клеток-предшественниц гемопоэза в долговременных жидких культурах костного мозга отнюдь не сопровождается появлением зрелых клеток всех гемопоэтических ростков, более того, уже после первой недели в культурах не остается ни морфологически различимых эритробластов, ни лимфоцитов — на поверхности культурального сосуда обнаруживаются только нейтрофильные гранулоциты, макрофаги и мегакариоциты (Dexter Т., 1979, Moore М., 1979). С этой точки зрения наиболее предпочтительным является культивирование уже коммитированных клетокпредшественниц, которые при адекватной стимуляции сформируют все пролиферирующие и созревающие элементы клеточной линии. Такая система была создана Ю. Захаровым и М. Прена, разработавшими в лаборатории М. Бессиса технику культивирования эритробластических островков костного мозга (Zakharov Y.M., Prenant М., 1982, 1983). В процессе исследования культур эритробластических островков Ю.М. Захаровым и Т. Алленом производилась непрерывная видеосъемка, позволяющая наблюдать и регистрировать во времени удвоение эритроидных клеток в "короне" островка, контакты центральных макрофагов с эритроидными клетками, локомоторные ответы макрофагов островков на внесение в культуральную среду эритропоэтина и других биологически активных веществ. Предварительное выделение эритробластических островков из ткани костного мозга и адгезия их на поверхности культурального сосуда позволяет получить совокупность эритроидных клеток, ассоциированных с макрофагами, в монослое, лишенном стромальных элементов, что исключает возможное эритропоэзиндуцирующее или ингибирующее действие фибронектина, коллагена, фибробластов, адипоцитов и т.д. При сравнительном анализе качественного состава ЭО была установлена идентичность распределения островков по классам зрелости в костном мозге здоровых людей и интактных лабораторных животных (белых беспородных крыс и крыс линии Вистар): большую часть популяции ЭО костного мозга человека и указанных лабораторных животных составляют островки, имеющие зрелую эритроидную «корону», а также реконструирующиеся ЭО, обеспечивающие поддержание должного уровня эритроцитов в крови за счет развития новой волны эритропоэза в «короне» инволюцирующих островков (Захаров Ю.М., Рассохин А.Г., 2002; Коробкин А.В., 1988). В связи с этим, развивающиеся в условиях in vitro эритробластические островки костного мозга лабораторных животных представляют собой адекватную модель эритропоэза, протекающего в человеческом организме, и изучение закономерностей межклеточных взаимодействий в ЭО, интенсивности пролиферации, дифференциации и созревания эритроидных клеток в них позволит раскрыть ранее неизвестные стороны регуляции костномозгового эритропоэза, а также выявить природу нарушений развития эритроидного ростка кроветворения, что является важной и актуальной проблемой современной экспериментальной и клинической гематологии.
Цель исследования: определение закономерностей течения эритропоэза в культуре эритробластических островков, создание модели физиологического и компенсационного эритропоэза in vitro, изучение значения межклеточных взаимодействий в эритробластических островках для регуляции развития эритроидных клеток.
Задачи исследования:
1. Изучить характер зависимости состояния эритропоэза в культуре ЭО от количества эритропоэтина в культуральной среде и длительности культивирования островков. Определить дозы эритропоэтина, необходимые для поддержания эритропоэза в культуре ЭО на физиологическом уровне и дозы, стимулирующие эритропоэз in vitro на уровне компенсационного.
2. По продолжительности митотического цикла и интенсивности созревания эритроидных клеток в «короне» ЭО, изменению фагоцитарной активности центральных макрофагов островков выявить закономерности развития ЭО, культивируемых в присутствии разных доз эритропоэтина.
3. Исследовать динамику количественного и качественного состава культур ЭО, а также изменения продолжительности митотического цикла эритроидных клеток «короны» островков при дозозависимой стимуляции функций центральных макрофагов островков макрофагальным колониестимулирующим фактором.
4. Оценить возможный характер регуляторных воздействий катехоламинов на эритропоэз в культуре ЭО по изменению клеточного состава эритроидной «короны» ЭО, динамике пролиферативной активности эритробластов и изменению фагоцитарной функции центральных макрофагов ЭО.
5. Изучить закономерности взаимодействий культивируемых ЭО с клетками других гемопоэтических линий, проанализировать изменения клеточного состава ЭО при стимуляции и угнетении эритропоэза в культуре островков.
6. Исследовать в культуре ЭО дозозависимое действие фракций «средних молекул», выделенных из плазмы интактных и обожженных животных, на процессы пролиферации эритроидных клеток и характер межклеточных взаимодействий в «короне» островков.
7. Создать математические модели эритропоэза in vitro.
Научная новизна: Впервые in vitro изучены закономерности развития эритробластических островков различных классов зрелости при культивировании ЭО костного мозга интактных животных в присутствии эритропоэтина в культуральной среде в дозах от 0,06 до 1,5 МЕ/мл. Установлено, что культура ЭО — это оригинальный способ моделирования физиологического и компенсационного эритропоэза. Добавление в культуральную среду 0,25-0,5 МЕ/мл эритропоэтина приводит к формированию новых ЭО в культуре как на базе контакта КОЕэ с резидуальными макрофагами, так и на основе взаимодействия КОЕэ с «короной» инволюцирующих островков в объемах, соответствующих физиологическому уровню развития ЭО в костном мозге. Увеличение количества эритропоэтина в культуральной среде до 1-1,5 МЕ/мл приводит к резкому всплеску пролиферативных процессов в «короне» ЭО в первые 48 часов культивирования, что соответствует картине раннего ответа эритроидной ткани при компенсационном эритропоэзе.
Впервые при изучении эритропоэза in vitro для эритроидных клеток «короны» ЭО пролиферирующих классов (ЭО 1, 2 классов зрелости и реконструирующихся ЭО) рассчитана продолжительность митотического цикла (tc), включающего в себя фазы Gi, S, G2 и М, а также получены данные об изменении генерационного времени способных к делению эритроидных клеток при стимуляции эритропоэза в культуре эритропоэтином и модуляции процесса развития эритроидной «короны» ЭО колониестимулирующим фактором макрофагальным, катехоламинами, фракциями «средних молекул», выделенными из плазмы интактных и обожженных животных.
На основе данных о зависимости общего количества ЭО в культуре и числа островков пролиферирующих классов от дозы эритропоэтина и длительности культивирования построена математическая модель развития эритропоэза in vitro. Впервые с целью оптимизации работы по изучению интенсивности пролиферативного ответа культур ЭО на действие эритропоэзиндуцирующих и ингибирующих развитие эритроидного ростка кроветворения факторов в ходе экспериментального исследования применен последовательный критерий отношения правдоподобия (критерий Вальда).
Получены новые данные об изменении фагоцитарной способности центральных макрофагов культивируемых ЭО под влиянием возрастающих концентраций эритропоэтина в культуральной среде. Доказано, что при стимуляции эритропоэза активность и интенсивность фагоцитарной реакции центральных макрофагов островков увеличивается на этапе образования ассоциации «макрофаг КОЕэ», а не только в ЭО, имеющих зрелую эритроидную «корону», как было показано ранее при исследовании фагоцитарной способности центральных макрофагов ЭО костного мозга, выполненном в условиях стимулированного эритропоэза (Захаров Ю.М., Варыпаева Л.П., 1992, 1997).
Впервые установлено, что специфическая стимуляция функций центральных макрофагов ЭО макрофагальным колониестимулирующим фактором сопровождается торможением пролиферативной активности эритроидных клеток их «короны», что свидетельствует о возможном изменении роли центральных макрофагов ЭО по отношению к развивающимся в их «короне» эритроидным клеткам.
Впервые показано, что терминальные стадии эритропоэза, происходящие в эритробластических островках, контролируются медиаторами симпатического отдела вегетативной нервной системы. Введение в культуральную среду норадреналина вызывает выраженную активацию пролиферативных процессов в ЭО в первые сутки культивирования, а эритропоэзстимулирующий эффект адреналина начинает проявлять себя только через 72 часа.
Получены новые данные о влиянии веществ полиэлектролитной природы с молекулярной массой от 0,5-1,5 кДа на эритропоэз. Установлено, что быстроэлюируемые фракции «средних молекул», выделенные из крови интактных животных, обладают разнонаправленным действием на процессы дифференциации, пролиферации и созревания эритроидных клеток в ЭО, что по-видимому, создает определенный баланс между эритропоэз-стимулирующим и эритропоэзтормозящим действием среднемолекулярных веществ полиэлектролитной природы. Фракции «средних молекул», выделенные из крови обожженных животных и обладающие выраженными проксидантными свойствами, угнетают развитие эритроидных клеток, а к 72 часу культивирования вызывают полный лизис культур.
Впервые при исследовании культуры ЭО получены данные о характере изменений состава лейкоцитарных клеток, взаимодействующих с «короной» островков. Показано, что лимфоидные клетки вступают в контакт исключительно с ЭО пролиферирующих классов зрелости. При стимуляции эритропоэза частота контактов молодых ЭО с лимфоидными клетками увеличивается, при торможении пролиферативных процессов в культуре - уменьшается. Присутствие лимфоидных клеток в «короне» культивируемых ЭО, морфологически неотличимых от КОЕэ, объясняет факт самообновления культуры, так как только при наличии колониеобразующих единиц, дающих начало эритроидному ростку, происходит процесс новообразования островков. Показано также, что по мере созревания эритроидных клеток увеличивается частота контактов «короны» ЭО с нейтрофильными и эозинофильными гранулоцитами.
Практическая значимость работы. Метод исследования эритропоэза в культуре ЭО представляет собой тест-систему, позволяющую моделировать различные физиологические и патологические состояния организма при дозированном изменении исходных параметров в культуре ЭО, а также введении в культуральную среду различных гормонов, цитокинов, ростовых факторов, лекарственных веществ. Использование математической модели развития эритропоэза в культуре ЭО значительно сокращает трудоемкость предварительных этапов экспериментов, а также материальные затраты на них. На примере тестирования эритропоэтина, произведенного двумя различными фирмами, в работе продемонстрированы возможности исследования эффективности действия цитокинов на эритропоэз в культуре ЭО.
Данные об ингибирующем влиянии фракций «средних молекул», выделенных из крови обожженных животных, на эритроидную ткань раскрыли новые механизмы возникновения ожоговой анемии, упорный характер течения которой часто осложняет период реабилитации больных с обширными термическими поражениями.
Основные положения, выносимые на защиту
1. Культура ЭО представляет собой экспериментальную модель физиологического и компенсационного эритропоэза. Эритропоэз в культуре ЭО, подобно костномозговому эритропоэзу in vivo, сохраняет чувствительность к нервной и гуморальной регуляции, что свидетельствует о сохранности рецепторных и секреторных свойств у центральных макрофагов островков и эритроидных клеток их «короны», а также пролиферативного потенциала эритроидных клеток-предшественниц.
2. Модуляция поддерживающих эритропоэз свойств центральных макрофагов ЭО макрофагальным колониестимулирующим фактором сопровождается угнетением пролиферативных процессов в эритроидных клетках «короны» эритробластических островков. Катехоламины стимулируют пролиферативную активность эритроидных клеток и уменьшают продолжительность их митотического цикла. Фракции «средних молекул», выделенные из плазмы обожженных животных, угнетают эритропоэз в ЭО, что подтверждает их важную роль в патогенезе ожоговой анемии.
Апробация работы. Результаты исследования были представлены на XVII и XIX съездах физиологов России (Ростов-на-Дону, 1998; Екатеринбург, 2004), Всероссийской научной конференции с международным участием, посвященной 150-летию со дня рождения академика И.П. Павлова (Санкт-Петербург, 1999), международной научной конференции «Актуальные вопросы патологической анатомии» (Челябинск, 2001), III Всероссийской научно-практической конференции с международным участием «Инжиниринг в медицине» (Челябинск,
2002), научно-практической конференции «Актуальные проблемы медицинской науки и практического здравоохранения» (г.Трехгорный,
2003), международном научном симпозиуме "Югра-ГЕМО" (Ханты-Мансийск, 2004), научной сессии, посвященной 60-летию Челябинской государственной медицинской академии (Челябинск, 2004), III Российском конгрессе по патофизиологии с международным участием «Дизрегуляционная патология органов и систем» (Москва, 2004), межрегиональной научно-практической конференции "Актуальные вопросы патологии", посвящённой 70-летию кафедр патологической анатомии и патофизиологии Башкирского государственного медицинского университета (Уфа, 2004), международной научно-практической конференции «Морфофункциональные аспекты регенерации и адаптационной дифференцировки структурных компонентов опорно-двигательного аппарата в условиях механических воздействий» (Курган, 2004), неоднократно доложены на заседаниях Челябинского отделения Всероссийского физиологического общества им. академика И.П. Павлова и кафедры нормальной физиологии Челябинской государственной медицинской академии.
Основные положения работы освещены в 24 научных публикациях.
Работа выполнена на базе проблемной научно-исследовательской лаборатории экспериментальной и экологической физиологии системы крови, иммунитета и цитогенетики Южно-Уральского научного, центра РАМН (руководитель лаборатории - заслуженный деятель науки РФ, академик РАМН Ю.М. Захаров) и кафедры нормальной физиологии ЧелГМА (зав. кафедрой — заслуженный деятель науки РФ, академик РАМН Ю.М. Захаров) при содействии центра математической и статистической поддержки медицинских исследований при ЧелГМА (руководитель центра - доцент ЧелГМА, к.т.н. А.А. Болотов).
Автор искренне благодарит всех сотрудников лаборатории ЮУНЦ РАМН и кафедры нормальной физиологии ЧелГМА, оказавших помощь в выполнении работы.
