Главная » 2013 » Ноябрь » 18 » Скачать Молекулярные возможности генотипирования антигенов тромбоцитов человека. Макарик, Татьяна Викторовна бесплатно
22:15
Скачать Молекулярные возможности генотипирования антигенов тромбоцитов человека. Макарик, Татьяна Викторовна бесплатно
Молекулярные возможности генотипирования антигенов тромбоцитов человека
Диссертация
Автор: Макарик, Татьяна Викторовна
Название: Молекулярные возможности генотипирования антигенов тромбоцитов человека
Справка: Макарик, Татьяна Викторовна. Молекулярные возможности генотипирования антигенов тромбоцитов человека : диссертация кандидата биологических наук : 03.00.04 Москва, 2005 74 c. : 61 05-3/1636
Объем: 74 стр.
Информация: Москва, 2005
Содержание:
ОГЛАВЛЕНИЕ
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ
ВВЕДЕНИЕ
ГЛАВА 1 ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
11 Серологические и молекулярные методы типирования тромбоцитспецифических антигенов системы нра человека
111 Иммуносерологические методы
112 Методы, основанные на ДНК-диагностике
12 иммуногенетика антигенов тромбоцитов человека
121 Параметры иммуногенетики
122 Особенности распределения антигенов среди представителей различных рас и этнических групп
ГЛАВА 2 МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
21 Материалы исследования
22 Полимеразная цепная реакция с использованием сиквенс-специфических праймеров
23 Статистическая обработка данных
ГЛАВА 3 РЕЗУЛЬТАТЫ
31 Полимеразная цепная реакция с использованием модифицированных сиквенс-специфических праймеров
32 Иммуногенетические параметры тромбоцит-специфических антигенов у кадровых доноров компонентов крови г Москвы и у представителей армянской и хакасской национальностей
321 Иммуногенетические параметры НРА у кадровых доноров компонентов крови г Москвы
322 Частоты аллелей и генотипов HP А среди представителей армянской национальности
323 Частоты аллелей и генотипов среди представителей хакасской национальности
324 Сравнение частоты аллелей и генотипов HP А в обследованных выборках разных этнических групп
33 Частота аллелей генов тромбоцитспецифических антигенов среди жителей России как основа формирования контингента типированных доноров
Введение:
Ф Антигены тромбоцитов человека (HPА) включают 16 известных на сегодняшний день биаллельных систем [Ouwehand W. et al., 2000]. Каждый аллоантиген, как было показано, является результатом изменения единичного нуклеотида в последовательности ДНК, приводящего к замене аминокислоты на белковом уровне. Это приводит к изменению третичной структуры мембранных гликопротеинов и, соответственно, возникновению разных эпитопов - мишеней для трансфузионной аллоиммунизации [Norton A. et al., 2004]. Кроме НРА на тромбоцитах локализуются антигены главного комплекса гистосовместимости (HLA). По некоторым данным трансфузия концентратов тромбоцитов без примеси лейкоцитов не вызывает первичную аллоиммунизацию к HLA [Novotny V.M.J, et al., 1995]. Аллоиммунизация к антигенам тромбоцитов может вызывать пост-трансфузионную пурпуру и рефрактерность к трансфузиям тромбоцитов, кроме того, при беременности аллоиммунизация может быть причиной тромбоцитопении новорожденного [Waters А.Н. et al., 1992, Murphy M.F. et al., 1999, Kekomaki S. et al., 1998]. Необходимым компонентом диагностики и последующего лечения пациентов с этими синдромами является возможность быстрого и точного типирования антигенов тромбоцитов. Традиционно, при определении фенотипа тромбоцитов используют аллоиммунную сыворотку человека,
Ф однако, не ко всем антигенам системы НРА получены антитела [Simsek S. et al., 1994]. Кроме того, в случаях заболеваний системы крови низкий уровень тромбоцитов у значительной части пациентов ограничивает возможность серологического типирования тромбоцитов.
В последнее время для типирования НРА применяют методы, основанные на ДНК-диагностике, такие как полимеразная цепная реакция с последующей рестрикцией полиморфных фрагментов (PCR-RFLP) и секвенирование ДНК [Newmen P.J. et al., 1994]. Эти методы достаточно сложны и дорогостоящи. В отличие от них новый подход с использованием в 5 полимеразной цепной реакции сиквенс-специфичных праймеров представляет собой технически простой и экономичный метод генотипирования НРА. Эффективная амплификация возможна только тогда, когда 3" конец праймера комплементарен последовательности сайта аллельной вариации. Используя серию праймеров, каждый из которых специфично амплифицирует только один аллель НРА, можно сделать вывод о присутствии или отсутствии соответствующих антигенов.
Частоты аллоантигенов тромбоцитов человека различаются между расами и этническими группами. Недавние популяционные исследования показали существенные различия в распределении ЕРА у представителей европеоидной [Simsek S. et al., 1993, Kekomaki S. et al.,1995, Kim H. et al., 1995, Covas D. Et al., 1997, Drzewek K. Et al., 1998] и монголоидной рас [Seo D. et al., 1998, Chang Y.et al., 1998, Chiba A. et al., 2000]. Получены данные о встречаемости НРА-генов в выборках жителей России [Зотшсов Е.А. и др., 2003, Головкина Л.Л. и др., 2004, Golovkina L. et al., 2004]. Изучение частоты аллелей НРА позволяет сделать вывод о перемещении генов и получить важную иммуногенетическую характеристику популяции. Практическое значение генотипирования НРА в первую очередь проявляется в трансфузиологии, поскольку лица белой расы с выраженным полиморфизмом генов НРА-1, -2, -5 являются «реактивными» донорами для реципиентов монголоидной расы, для которой полиморфизм указанных генов не характерен.
Генотипирование антигенов тромбоцитов человека методом полимеразной цепной реакции позволит проводить трансфузии тромбоцитов с учетом их антигенной структуры у донора и реципиента.
ЦЕЛЬ РАБОТЫ.
На основе полимеразной цепной реакции с использованием сиквенс-специфичных праймеров разработать тест-систему для изучения распределения пяти клинически важных антигенов тромбоцитов (НРА 1-5) у кадровых доноров компонентов крови.
ОСНОВНЫЕ ЗАДАЧИ ИССЛЕДОВАНИЯ.
1. Оптимизация тест-системы на основе полимеразной цепной реакции с использованием сиквенс-специфических праймеров; сравнение результатов генотипирования, полученных с помощью модифицированной нами тест-системы и тест-системы фирмы «PROTRANS».
2. Использование модифицированной тест-системы для генотипирования кадровых доноров компонентов крови по системе ЕРА.
3. Изучение иммуногенетических параметров НРА у кадровых доноров компонентов крови и представителей некоторых этнических групп России.
4. Вычисление величины контингента НРА-типированных доноров, необходимого для обеспечения НРА-совместимых трансфузий.
НАУЧНАЯ НОВИЗНА РАБОТЫ.
Разработана модифицированная тест-система на основе полимеразной цепной реакции с использованием сиквенс-специфических праймеров для генотипирования антигенов тромбоцитов человека. Впервые в России рассчитаны все иммуногенетические параметры НРА у кадровых доноров компонентов крови, а также получены ориентировочные данные о распределении частот аллелей и генотипов в двух генетически отдаленных этнических группах (армяне и хакасы). Предложен подход к формированию контингента НРА-типированных доноров в России.
ЗНАЧЕНИЕ ДЛЯ ТЕОРИИ И ПРАКТИКИ.
Предложенная в работе модифицированная тест-система на основе полимеразной цепной реакции рекомендуется к использованию для генотипирования антигенов тромбоцитов доноров и реципиентов с целью предотвращения посттрансфузионных осложнений и создания контингента типированных по НРА кадровых доноров компонентов крови.
ПУБЛИКАЦИИ.
По материалам диссертации опубликованы 4 работы. Результаты диссертации доложены на 19-й Европейской конференции по иммуногенетике и гистосовместимости (Стамбул, 2005г.) и на 28-й конференции «Лейкозы и лимфомы. Терапия и фундаментальные исследования» (Москва, 2005г.).
СТРУКТУРА ДИССЕРТАЦИИ.
Диссертация изложена на 74 страницах, состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов, изложения результатов, заключения, выводов и списка цитируемой литературы. Работа содержит 8 рисунков, 3 диаграммы и 14 таблиц.
