Усиленный атерогенный эффект макрофагов из моноцитов крови больных ИБС, выявленный в аэробных условиях и при аноксии in vitro
Диссертация
Автор: Хильченко, Алексей Валериевич
Название: Усиленный атерогенный эффект макрофагов из моноцитов крови больных ИБС, выявленный в аэробных условиях и при аноксии in vitro
Справка: Хильченко, Алексей Валериевич. Усиленный атерогенный эффект макрофагов из моноцитов крови больных ИБС, выявленный в аэробных условиях и при аноксии in vitro : диссертация кандидата биологических наук : 03.00.04 / Хильченко Алексей Валериевич; [Место защиты: Науч.-исслед. ин-т биомед. химии им. В.Н. Ореховича РАМН] Москва, 2008 87 c. : 61 08-3/141
Объем: 87 стр.
Информация: Москва, 2008
Содержание:
ВВЕДЕНИЕ
ГЛАВА 1 ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
11 Происхождение и функции макрофагов
12 Механизмы предактивации и активации МФ
13 Взаимодействие МФ и окисленных ЛНП in vivo
14 Метаболизм ЛНП липидов и холестерина в макрофагах
ГЛАВА 2 МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
21 использованные материалы
22 Растворы и среды
23 Клеточная модель
24 выделение ЛНП из плазмы крови человека
25 Модель моноцит/макрофаг зависимого окисления ЛНП
26 Оценка окислительной модификации ЛНПн и ЛНПг
27 Измерение числа жизнеспособных моноцитов/макрофагов
28 Захват моноцитами/макрофагами ЛНП
29 Метод статистического анализа
ГЛАВА 3 РЕЗУЛЬТАТЫ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ
31 Изучение способности МФн, окислять и поглощать Л НПн, и ЛНПГ в аэробных условиях и в условиях аноксии in vitro
32 Разработка метода предактивации и активации МФн с помощью ФНО-а, и сравнение их способности окислять ЛНПн in vitro
33 Изучение способности МФибс, окислять и поглощать ЛНПн и ЛНПГ в аэробных условиях и в условиях аноксии in vitro
34 Сравнение и обсуждение способности МФн и МФИБс окислять и поглощать ЛНПн и ЛНПГ в аэробных условиях и условиях аноксии
ВЫВОДЫ
Введение:
В последние десятилетия одной из главных причин заболеваемости и смертности населения является возникновение и/или прогрессирование атеросклероза. Хотя в течение последних десяти лет было предложено несколько гипотез развития атеросклероза, ни одна из них не может полностью объяснить процесс патогенеза атеросклероза в целом, так как развитие атеросклероза связано с многочисленными факторами «риска».
Несмотря на это, в настоящее время хорошо известно, что клеточным элементам сосудистой стенки, а также циркулирующим моноцитам/макроф&гам принадлежит существенная роль в патогенезе атеросклероза [40, 64].
Этому способствуют факторы «риска», к которым принадлежат гипертония, курение, стресс и другие факторы [123, 132]. Факторы «риска» сопровождаются генерализованной, а также локальной ишемии сосудистой стенки [57, 137], что ведет к выделению эндотелиальными клетками (ЭК), макрофагами (МФ), гладкомышечными и другими клетками активных форм кислорода (АФК), провоспалительных цитокинов (ФНО-а, ИЛ-1, ИЛ-6 и др.), участвующих в стимуляции макрофагов и их способности окислять ЛНП [18].
Окислительная способность макрофагов обусловлена стимуляцией их НАДФН-оксидазной и миелопероксидазной систем [6]. Имеются данные, согласно которым лишь стимулированные моноциты/макрофаги обладают способностью осуществлять свои многоплановые функции, в том числе выделять АФК, окислять и поглощать ЛНП [108].
В настоящее время установлено, что переход макрофагов из нестимулированного в стимулированное состояние проходит через стадию предстимуляции (прайминга), которая возникает при первичном воздействии стимула и заключается в повышении экспрессии и аффинности поверхностных скавенджер-рецепторов макрофагов, активизации ферментов ГМФШ, нарабатывание комплекса НАДФН-оксидазы [18].
Однако, в стимулированное состояние предстимулированные макрофаги переходят лишь после повторного стимула, при котором макрофаги уже становятся способными к продукции АФК, синтезу биологически активных веществ, проявлению атерогенных (окисление и поглощение ЛЫП) функций [19, 18, 65, 128, 154].
Однако, дозы цитокинов и сроки инкубации, необходимые для предстимуляции и стимуляции макрофагов, а также способность предстимулированных и стимулированных макрофагов крови человека окислительно модифицировать ЛНП, не исследованы.
Особенно важным является вопрос об условиях предактивации и активации моноцитов/макрофагов in vivo. Исследование этого вопроса особенно важно для профилактики возникновения и прогрессирования атеросклероза у пациентов с ишемической болезнью сердца (ИБС), количество которых достигает 30-40% численности больных индустриальных городов большинства стран мира. Это заболевание стоит на одном из первых мест по числу летальных исходов, и до настоящего времени к нему не подобрана ранняя и эффективная терапия.
Многократно показано, что в крови больных ИБС резко повышено содержание таких цитокинов как ИЛ-1, ИЛ-6, ФНО-а и др., которые, как показано in vitro, и являются активными стимуляторами моноцитов/макрофагов [79, 80, 110, 115, 146, 156].
Однако, за исключением данных об изменении генных и морфологических признаков активации лейкоцитов и моноцитов, работ, указывающих на усиление атерогенной функции макрофагов, полученных из моноцитов крови больных ИБС, в литературе не найдено, что препятствует направленному воздействию на свойства макрофагов у больных ИБС.
Наряду с клеточными элементами сосудистой стенки и крови, существенная роль в атерогенезе принадлежит уровню холестерина в крови людей и степени окисленности ЛНП*.
Показано, что количество окислительно модифицированных ЛНП в крови гиперхолестеринемичных людей [23, 54] или животных [22, 76] выше, чем в крови людей и животных с нормальным содержанием холестерина.
Липопротеины низкой плотности у больных с гиперхолестеринемией содержат более высокое количество не только свободного холестерина и триглицеридов, но и продуктов перекисного окисления липидов (ПОЛ), кроме того, они характеризуются более низким содержанием антиоксидантов (Коэнзим Qio, Вит.Е) и обладают более высоким отрицательным зарядом, характеризующим модификацию апо-В белка, что обуславливает их способность быть распознанными и практически недозируемо поглощенными макрофагами (МФ) [138, 141, 150].
Однако, спобность ЛНП, полученных от людей с гиперхолестеринемией, подвергаться дальнейшему in vivo или in vitro окислению по сравнению с ЛНП, полученными из крови здоровых доноров (ЛНПн) изучена недостаточно, имеющиеся работы единичны, проведены, главным образом, с использованием Си2 -опосредованного окисления и не содержат анализа показателей, характеризующих окислительную модификацию апо-В белка и способность МФ поглощать окисленные ЛНП.
Существенную роль в предстимуляции и стимуляции макрофагов играет гипоксия и ишемия, при которых усиливается продукция АФК, а в самих тканях и циркулирующей крови резко возрастает содеражание продуктов ПОЛ [2,-7, 9, 42, 43, 45].
Однако, влияние условий ишемии на способность МФ окислять и поглощать окисленные ЛНП, исследовано недостаточно.
В связи с этим целью настоящей работы является изучение способности макрофагов, полученных из моноцитов крови здоровых доноров и больных ИБС, окислять и поглощать липопротеины низкой плотности, полученные от здоровых доноров и людей с гиперхолестеринемией, при их инкубации в аэробных условиях и при аноксии in vitro.
Для достижения поставленной цели сформулированы следующие задачи:
1. Изучить способность макрофагов, полученных из моноцитов крови здоровых доноров (МФН), окислять и поглощать ЛНПн и ЛНПГ в аэробных условиях и в условиях аноксии in vitro.
2. С помощью ФНО-а разработать метод предстимуляции и стимуляции макрофагов, полученных из моноцитов крови здоровых доноров (МФн) в условиях in vitro; сравнить способность нестимулированных и стимулированных in vitro макрофагов окислять ЛНПн.
3. Изучить способность макрофагов, полученных из моноцитов крови больных ИБС (МФибсХ окислять и поглощать ЛНПн и ЛНПГ в аэробных условиях и в условиях аноксии in vitro.
4. Сравнить способность макрофагов, полученных из моноцитов крови больных ИБС и здоровых доноров, окислять и поглощать ЛНПн и ЛНПГ в аэробных условиях и в условиях аноксии in vitro.
|
